土壤脱氢酶 Soil dehydrogenase, sDHA 试剂盒说明书
(分光光度法 50T/24S)
测定意义
土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物 以及其对有机物的降解活性，可以作为土壤微生物的降解性能指标
测定原理
氢 体 2, 3, 5 - 化 苯 四 唑 2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC 在细胞呼吸
过程中接 氢以后，被还原为 苯 甲鐟 Triphenyl Formazone, TF ，TF 呈现红色，在波长 485nm 处有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm 测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性
自备实验仪器及用品
筛子 天恒温 养箱或水浴锅温离心机 可见分光光度玻璃比色皿，冰 蒸馏
水 丙酮允许快递，请用户自备
试剂的组成和配制
试剂一：粉剂×1 瓶，使用前加 30mL 水溶解，4℃避光保存 尽 现配现用试剂 ：液体 50mL×1 瓶，4℃保存试剂 ：丙酮，自备
样品处理
1、土壤样品：准确称取过40目筛的新鲜土壤样品约0.1g（以保证TTC与土壤颗粒充分接触）。
2、污泥样品：污泥用蒸馏水洗涤，12000rpm，25℃，离心10min，弃上清，反复3-4次。
测定步骤和操作表
对照管 测定管
样品（g） 0.1 0.1
试剂一（mL） 0.5
试剂二（mL） 1 0.5
充分混匀，37℃，暗培养6h，取出后立即水浴5min
试剂三（mL） 0.5 0.5
反复振荡数次，37℃保温10min，12000rpm，4℃，离心5min，取上清1mL于1mL玻璃比色皿，对照管调零，测定A485.
脱氢酶活力计算
酶活单位定义：在37℃时，每克样品每小时使反应体系OD值每增加0.01为一个酶活单位。
计算公式：SDHA活性（U/g）=A485/0.01÷培养时间（h）÷样品质量（g）=16.67×A485÷样品质量（g）
注意事项
1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃，最好在一周内使用，若出现红色，则 能使用
2. 试剂 易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作
3. 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除 净残留的反应液
4. 如果测定出来的吸光值较大， 少样品用 再进行测定
5. 试剂盒 2-8℃保存
