蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书_企业动态

蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

测定意义

蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。

测定原理

SS 催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存试剂四：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

混匀，80℃水浴保温 10min，冷却后，以蒸馏水调零，480nm 下测定各管吸光值。

SS 活性计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS 活性(U/mg prot)=(C 标准管×V1×A 测定管÷A 标准管)÷(V1×Cpr)÷T=100×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS 活性(U/g 鲜重) = (C 标准管×V1×A 测定管÷A 标准管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×A 测定管÷A

标准管÷W

C 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。