细胞介导细胞毒试验
细胞毒是细胞介导免疫的主要效应之一,是机体的一种免疫监督机制,因此,细胞毒试验(包括NK,ADCC,LAK,TIL,CTL等)是一项重要的免疫指标。传统的同位素示踪、染料排斥、荧光法等都有同位素污染、人为因素影响等缺点。FCM法综合了上述常规法的优点,越来越引起临床医学家的重视。
碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料排斥法 利用PI可以渗透到死细胞内使核染色的特点,用FCM分析死亡靶细胞比例。此方法还有一个51Cr释放法不能比拟的长处,即不但可以测定单次细胞毒试验(SCCA),也可以观察NK细胞的再循环杀伤作用,即:效应细胞杀死一个靶细胞后,可再杀伤其他细胞的能力,称之总细胞毒试验(TCCA)。
FDA-FCM试验 基本原理同PI排斥法,但它同前者相反,是以荧光染料FDA在活细胞内滞留,以计算活细胞数为基础。FDA可以穿通活的细胞膜进入胞内,受胞内脂酶水解,产生荧光物质留于胞内;细胞受杀伤时,染料排出,以确定杀伤效应。
细胞光扫描法 通过靶细胞受效应细胞杀伤后发生形态的改变及光扫描特性变化,在排除效应细胞群体后,用特设的阈值把死活的两群靶细胞分开,计算杀伤效应。
也有学者用双标记细胞毒法,即用绿荧光色素标记效应细胞,用红色荧光素标记靶细胞,在细胞裂解前,用FCM定量测定效应细胞和靶细胞的结合体形成。