实体组织分散为单个细胞的实例
Pallavivini为了进行细胞周期动力学分析，分散实体瘤常用中性蛋白酶处理细胞，具体步骤是：
1、配制中性蛋白酶（Neutral Protease）（Boehringer—Mannheim，Indiapolis，IN）消化液：以1mg/ml的浓度将中性蛋白酶溶解在无钙离子的PBS中（pH7.4），3g瘤组织约需要25ml消化液。
2、取下瘤块在冷PBS中截成几小块，再转入中性蛋白酶中，剪碎瘤块。
3、37℃恒温振荡1小时。
4、将过滤后的细胞悬液，用PBS离心洗两次。
5、弃上清，将细胞沉淀打匀，用注射器或细吸管将细胞喷入预冷的70%乙醇中固定。
6、至少固定细胞12小时后，即可进行染色。
Pallavivini比较了中性蛋白酶、胰酶加DNA酶两种酶处理KHT实体瘤分散单个细胞的效果，为了比较分散的细胞群体中各周期时相的分布，将接种实体瘤的小鼠注射3H—胸腺嘧啶核苷，然后取一半瘤用来比较两种酶处理的效果，另一半瘤被固定后制备成组织切片，通过放射自显影比较酶分散的细胞悬液中和组织切片中细胞的标记指数。比较的结果是：两种酶消化处理的细胞悬液和组织切片获得的标记指数没有显著的不同，但表明两种酶处理对获得含量较小的亚群都不够敏感。此外，两种酶处理比较的其它结果是：用中性蛋白酶处理，比DNA酶加胰酶混合酶处理小鼠KHT肉瘤所形成的单个细胞，在体内或体外克隆形成力高约1.5倍，细胞产额高约2倍。用两种酶处理所得到的DNA分布图质量都很高，变异系数约为3—5%，碎片和丛结都较少。因此，对于KHT肉瘤细胞，两种酶处理法都是可行的。
实体组织分散为单个细胞的另一个例子是美国Roche-ster医科大学耿中平等人对3种动物瘤和4种人的实体瘤进行了实体瘤分散实验。他们发现，只用机械法分散实体瘤速度快，但细胞失活率大。他们用4种酶消化液进行了一些对比实验，消化结果表明，3种酶混合液的效果大大优于胶原酶，而胶原酶又优于胰酶加DNA酶，使用胰酶效果最差。效果好的酶对于宿主细胞而言，可以获得较高比例的瘤细胞，较高比例的S期和G2M期细胞和较高的克隆形成能力。下面介绍他们的实体瘤分散步骤：
（1）、从动物身上取瘤后，立即投入4℃含有10%小牛血清的消毒的培养介质中。
（2）、取0.2—0.5g瘤组织并切碎。
（3）、将切碎的瘤组织放入一个盛有25ml 3种酶混合液的瓶中，浓度见前。
（4）、37℃恒温消化30—60分钟。消化后过滤，再将过滤后的细胞悬液在400g下离心10分钟。
（5）、弃去混合液，用含10%小牛血清的新鲜组织培养液将已被分散的瘤细胞洗两次。
（6）、将细胞重新悬浮在完全的组织培养介质中。
