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浅谈动物细胞培养基的种类和组成

点击次数:1793次     发布时间::2015/6/16 15:29:03

  浅谈动物细胞培养基的种类和组成
        总务细胞对培养及的要求较高,而且随着细胞的种系不同,要求有很大差异。因此常常需要花费很大的精力和时间去对个别的细胞系惊醒研究,一遍配制适于之一细胞特殊需求的培养基,用动物细胞制药其成本之所以较高,培养基复杂而昂贵是其主要的原因之一
动物细胞培养基的研究从发张历史看,大致可分为3类:天然培养基、合成培养基和无血清培养基。
1、天然培养基
在细胞培养早期阶段人们多采用该类材料做培养基,如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。由于该类材料成分复杂,组分不稳定,来源有限,因此不适于大量培养和生产的需要。
2、合成培养基
1950年Morgan等首先采用成分明确的化学试剂配制成了第一个合成培养基-199培养基,从而开船了合成培养基的研究试用阶段。他的优点是成分明确,组分稳定,可大量生产,为此神兽欢迎,至今已有几十种商品在市场上供应。在动物细胞培养中,采用最普通的有BME,MEM,DMEM、HAM法2、RPMI1640,以及ISOCOV、199和McCoy5A等。尽管品种繁多,但其组成都有如下基本分。
氨基酸
        氨基酸是细胞合成蛋白质、维持细胞生命不可缺少的物质,各种合成培养基中所含氨基酸种类和量不尽相同,但是少需含有细胞在生长中所必须的而又不能依赖自身合成的12中必须氨基酸,他们是精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、铬氨酸。此外谷氨酰胺几乎是所有细胞中药的碳源和能源。因此目前的商品合成培养基中含氨基酸种类最少的是含该13中氨基酸的 Eagle MEM培养基。其他的则根据其主要对象的需要而有所增加,最多的是含21中氨基酸的199培养基。由于细胞只能利用L型氨基酸,故配制时必须采用L型同分异构体,没有时可用DL混合型代替,但用量要加倍。
维生素
        维生素是一类重要的维持细胞生命活性的低分子活性物质,多数是形成酶的辅基或辅酶。由于他们不能靠细胞自己合成,或合成不足,所以必须从培养基中供给。可分为脂溶性和水溶性两种:脂溶性的有维生素A,维生素D,维生素E和维生素K等水溶性的有维生素B1(硫胺素),维生素B2,盐酸,烟酰胺,吡哆醇,吡哆醛,偏多酸钙,生物素,叶酸,维生素B12,维生素C,对氨基苯甲酸,胆碱和肌醇等,这些维生素中有些细胞培养中还起着特殊的张勇勇,如维生素A对细胞的贴壁有着重要作用:维生素C有抗氧化作用:胆碱对细胞膜的完整性有着重要作用,缺少时细胞边缘,以致死亡。、
糖类
       细胞的生产须依赖碳源,他是维持生命活动的能量来源。主要是葡萄糖和谷氨酰胺,当使用葡萄糖时,长须补充丙酮酸钠。有的培养基内还加油核糖和脱氧核糖,以及乙酸钠等
无机盐 
        无机盐的作用是保持细胞的渗透压,缓冲PH的变化,并积极参与细胞的代谢,一般合成培养基内含有氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸氢二钠、碳酸氢钠等。泳衣维持细胞的渗透压和缓冲PH的变化。另外在培养基内常加有硫酸亚铁、硫酸锌等。他们对促进细胞代谢有作用。
其他成分
        有些合成培养基中家有核酸的前提,如腺苷、鸟苷、胞苷、尿苷和胸苷等此外有的还加油一些氧化还原剂,如谷胱甘肽等。
尽管各种合成培养基给细胞培养提供了很大方便,单纯采用这种合成培养基,细胞常常不能很好的增殖,甚至不能贴壁。因此在使用时常常需要加入一定量的动物血清,最常用的是添加5%-10%的小牛血清。在杂交瘤细胞的培养中,对血清的要求更高,常需用10%-20%的胎牛血清。他的作用机制还不十分清楚,但至少有如下几个方面。
提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素。生长因子包括胰岛素,胰岛素样生长因子,表皮生长因子,成纤维细胞生长因子,血小板衍生的生长因子等。激素有皮质醇,雌二醇,睾酮。黄体酮和甲状腺等。
提供有利于熙宝贝所需的贴付因子和伸展因子。正如前面所提到的多刷细胞为贴壁细胞,他们必须贴付在某种载体上才能生长,血清可提供所需的贴付因子呢和伸展因子,如纤维结合蛋白,如姑苏,昆布氨酸和胶原等
提供可识别金属,激素,维生素和脂类的结合蛋白,如白蛋白可与维生素,脂类和激素结合,并将它们带入细胞,贴传递蛋白可结合和传送铁离子。他们还可消除某系毒素和金属的毒性作用。、
        提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素。脂肪酸中有林志磊胆固醇和前列腺E等,他们可能与其他生长因子结合后起作用。微量元素中有铜锌钴钼硒等,他们对酶有激活作用,并可保护自由基第DNA的损害。
除上述作用外,血清还可提供良好的PHE缓冲系统。
无血清培养基
        随着细胞培养规模的逐渐扩大,以及高技术生物制品生产的需要,无血清培养基的研究和采用已经提上了日程,他的优点如下1提高了细胞培养的可重复性,避免了由于许晴批次之间差异的影响2减少了由许晴带来的病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险3供应充足、稳定4细胞产品已于纯化5避免了徐庆忠某些因素对有些细胞的毒性。6减少了徐庆忠蛋白对某些生物测定的干扰,便于对实验结果的分析
        目前已有一批无血清培养基的问世,这些无血清培养基都是在上诉的合成培养基内加入不同种类的添加剂错构成。
激素和生长因在,在激素方面使用最多的是胰岛素,他的用量从1ug/ml至10ug/ml不等,他的作用除了能促进糖原和脂肪酸的合成外对细胞生长也有刺激作用此外有的无血清培养基内还添加有促卵泡激素,甲状腺素,催乳激素,DL-α生育酚等。在细胞生长因子方面用的较多的有表皮生长因子,成纤维细胞生长功能因子,圣经稀薄啊生长因子当
        结合蛋白  最经常被补充的是铁传递蛋白和白蛋白。为了便于纯化,有时可用硫酸亚铁溟濛酸铁,葡萄糖贴替代铁传递蛋白
、贴付和伸展因子。目前多数无血清培养基只适用于悬浮细胞,真正能用一培养铁壁细胞的很少,也很贵,原因就在于他们均缺少必须的贴付和伸张因子。而贴付和伸展的机制目前也还不十分清楚其中既有理化的因素,如电荷的引力。钙镁离子的作用等。又有一些其他因子的用专用,包括一些目前认为的贴付因子如纤维结合蛋白,胶原,以及一些多肽生长因子如表皮生长因子,成纤维细胞生长因子等的作用,除这些因子外有的还添加维生素A和从组的小太,他可与其细胞受体结合。
其他有利于细胞生长的因子和元素它们包括消除自由基算还的谷胱甘肽某些微量元素如硒等

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