1951你那法国学者Jacques Masquelier 首次发现了低聚原花青素具有强的抗氧化性能，是Ve的50倍，Vc的20倍，并且高效、低毒、高生物利用率。由于原花青素显著的自由基清除能力，抗氧化、清除自由基、抑制脂类过氧化，保护细胞内抗氧化防御系统，抑制剂活性，因此具有广泛的生化和药理活性，对近70多种疾病具有直接或间接的预防治疗作用。如预防、治疗心脑序贯疾病，具有抗过敏及抗炎活性，康致癌剂活性及抗癌作用以及皮肤保健及美容作用，此外，原花青素还有抗真菌，抗致突变活性、抗突变活性、抗辐射作用，抗腹泻，抗胃溃疡、抗菌抗病毒、抗龋齿、改善视觉功能、预防老年性痴呆、治疗运动损伤等功效、所以被广泛用于食品、饮料化妆品及医药保健等领域。1995年曾被美国公众评价为最受欢迎的10中植物药之一。

研究表明、葡萄籽萃取物及其所含有的花青素具有预防胃溃疡的生理功能。利用意大利产陈年红葡萄酒、新酿红葡萄酒及白葡萄酒为实验材料，结果表明以陈年红葡萄酒的抗氧化效果最佳。其阿红所含的花青素骑着举足轻重的作用，别切具有保护心脑血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射及美容的作用，可作为防癌、抗突变、放置心血管疾病药物的主要有效成分和用作安全无毒的新型天然抗氧化剂。因而在国内外以葡萄籽提取物中的元花青素为主要活性成分的药品、食品级营养补充剂以广泛应用，同时相应的单体花色素及其苷作为色素在医药、保健、食品等领域具有广泛的用途。冲天然资源废弃物中提取原花青素及其单体花色素是提高产品附加值，资源综合林勇的重要途径之一。葡萄籽皮作为葡萄酒及葡萄汁厂的下脚料是综合利用的中药资源。其他如山楂、落叶松树皮、残次苹果及皮等也是值得开发的资源。日美等国已开发出多中含有原花青素的苹果多酚保健品和化妆品。在此过程中必然涉及原料和产品中原花青素含量的测定问题。

        目前测定原花青素的方法有很多中，主要有正丁醇-演算法、香草醛-盐酸法、香草醛-硫酸法、铁盐催化比色法、薄层层析法、HPLF、HPLC-MS法等。在上述几种方法中，比色法测定具有较大误差。主要是其他多酚类物质的干扰。正丁醇-盐酸法受原花青素结构的影响较大、儿茶素或表儿茶素及其的具体等都能参加反应，测定的原花青素含量明显偏高，对于低聚合度原花青素的测定并不适宜。正丁醇-盐酸法测得的原花青素含量普遍普遍偏低其原因在于该法对原花青素化学结构的依赖性大，儿茶素等单体不反应。香草醛-硫酸法由于硫酸的强氧化作用，引起反应体系的依赖性大，儿茶素等单体不反应。香草醛-硫酸法由于硫酸的强氧化作用，引起反应体系放热、导致原花青素清华分解。也是的测定结果偏低。HPLC主要测定多种聚合度不同的原花青素结构。比较准确的方法是比色法和HPLC相结合的方法。葡萄籽提取物多酚类是由原花青素和几种单体组成的。葡萄籽提取物中中多酚的含量可采用Folin-ciocalteau法测定，单体的含量采用高效液相测定。因此葡萄籽提取物中原花青素的含量可由葡萄籽提取物中总多酚的含量减出其中单体含量求得。

        原花青素在酸性条件下，A环的化学活性较高，骑上的间苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩合、产物在浓酸作用下形成有色的正碳离子。原花青素在热酸作用下能产生红色物质，并可用分光光度法进行测定。对于单体原花青素系黄烷-3，4二醇来说,C-4位具有极强的亲电性，其羟基与C-5，C-7位上的酚羟基组成一个苄醇系统，是的4位碳易于生产正碳离子。在强酸作用下，正碳离子失去质子氧化产生花色素。对于聚合原花青素其单元见的链接键易在酸性作用下被打开。和其他方法相比，HPLC法最为精确，既能进行提取和分离，又能进行鉴定分析，反相的色谱法被证明是分析酚类化合物之有效的技术，该方法中的液相色谱带有梯度洗过装置，色谱柱主要为方向色谱柱，检测器采用紫外或光电二极管检测器等。

儿茶素和原花色素的紫外可见光谱在270-280nm间有最大吸收，色谱图中的紫外可见光谱峰可用于儿茶素和原花色素的检定。带有光带二极管系统检测的HPLC适用于上蔟要求，能对葡萄籽中的分级分离后的儿茶素和原花色素惊醒快速的分离、鉴定、和定量分析

具体操作如下

一、仪器与试剂

1、仪器 容量瓶、圆底烧瓶、超声仪、层析缸、紫外分析仪、滤纸、抽滤装置、烧杯、量筒、硅胶波曾层析板、电热套、冷凝管、层析柱、751G型在外-可见反光光度计，旋转薄膜蒸仪等

2、样品与试剂

1%香草醛甲醇溶液，8%盐酸甲醇溶液，葡萄籽粉，葡萄梗粉（石油醚脱脂,≤1mm）儿茶素，60%乙醇，乙酸乙酯，浓盐酸，浓硫酸，正丁醇，硫酸亚铁铵盐溶液，甲醇等。

实验内容与步骤

1、葡萄籽（梗）提取物的制备

称取3份石油醚脱脂后的干葡萄籽（梗）峰，没分2g，分别用60%乙醇以1:7的料液比，在50℃条件下提取3此，洗涤残渣，合并提取液及洗涤液，减压浓缩，加盐过滤，用1:3体积的乙酸乙酯萃取3此，减压浓缩萃取液，得到提取物，定容后备用。

2、改良的香草醛-盐酸法

1、标准曲线绘制 将儿茶素配制成浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/ml的溶液分别取1ml于25ml具塞试管中，加入香草醛盐酸显色液5ml，加塞摇匀，30±1℃很温水浴中避光显色反应30min后，以空白为对照，在500nm波长处测定A值，绘制标准曲线。

2、样品测定 将达侧样品配成浓度为0.1mg/ml的溶液，取1ml于25ml具塞试管中，加入6ml40mg/ml的香草醛家村溶液和3ml浓盐酸，加塞摇匀，在20±1℃的避光环境下反应15H后，一空白对照在500nm波长处测其A值，用儿茶素标准曲线计算样品中花青素的含量。

HPLC法

1、样品处理 将葡萄籽提取液用适量乙酸乙酯萃取3此，合并萃取液后旋转蒸发仪蒸干溶剂，残渣用少量甲醇溶解，定容至5ml，用HPLC测定

2、HPLC色谱条件 Exclips XDB C-18 4.6*250mm色谱柱

流动相：甲醇：0.1%甲酸水溶液=8：2

流速为1.0ml/min

紫外检测器检测波长276nm

个标准品溶液配制成20-50mg/L的浓度，根据 保留时间判断葡萄籽中所含花青素的种类，利用峰面积计算个中原花青素的含量。