环境因素对荧光强度的影响
溶液中的环境因素对分子荧光可能产生强烈的应先,了解和利用这一重要因素,可以提高荧光分析的灵敏度和选择性。
温度对溶液的荧光强度有显著的影响。在一般强狂下,随着温度的升高,溶液中的荧光物质在荧光效率和荧光强度将降低。这是因为,当温度升高时,分子运动速度加快,买分子碰撞几率增加,使无辐射跃迁增加,从而降低了荧光效率。如荧光钠素的乙醇溶液,在0℃一下温度每降低10℃,荧光量子产率约增加3%,冷却至-80℃时,荧光量子产率接近100%.
同一种荧光体在不同的溶剂中,其荧光光谱的形状和强度都可能会有显著的差别。一般情况下,荧光波长随着溶剂的极性的增大而长移,荧光强度也有所增强。这是因为在急性溶剂中π-π
跃迁所需的能量差△E小,而且跃迁几率增加,从而使紫外吸收波长和荧光波长均移,强度液增强。

溶剂粘度减小时,可以增加分子间碰撞机会,使无辐射跃迁增加而荧光减弱,故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。
计入荧光物质是一种弱酸式弱碱,溶液的PH值改变将对荧光强度产生很大的影响。这主要是因为弱酸、弱碱分子和他们的离子结构有所不同,在不同酸度中分子和离子间的平衡改变,因此荧光强度也有差异。每一种荧光物质都有它最适宜的发射荧光的存在形式,依旧是有其最适宜的ph值范围。例如,苯胺在不同PH值下有下列平衡关系

苯胺在ph7-12的溶液中主要以分子形式村子,由于-NH2为提高荧光效率的取代基,故苯胺分子会发生蓝色荧光。在PH<2和ph>13的溶液中均可苯胺离子形式存在,故不能发射银光。
当一束平行光照射的溶液样品上,大部分光线透过溶液,小部分由于光子和物质分子相碰撞。使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射,这种光称为散射光(scattering light)。
光子和物质分子放生了弹性碰撞时,不发生能量的交换。仅仅是光子运动方向发生改变,这种散射光叫做瑞利光,其波长与入射光波长相同。
光子和物质分子放生非弹性碰撞时,在光子运动方向发生改变的同时,光子和物质分子发生能量交换,光子把不封能量转给物质分子或物质分子获得部分能量,而发射出比入射光波长稍长或烧断的光,这两种光均为拉曼光。
散射光对荧光测定有干扰,尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光,引起波长与荧光波长接近,对荧光测定的干扰更大,必须采取措施消除。