用于培养人类卵细胞与胚胎的培养液有很多种，但其中组成成分大同小异。培养液的基本组成成分有水、电解质、能源供体、大分子自蛋白以及附加物质，包括维生素、激素及生长因子等。随着几年来商业性培养液的系统化和相对正规化，越来越多的实验室采用第一种方式，直接定期购买商品化培养液。

培养液的组成与作用

1、水 水是培养液的主要成分，约占全部组成的99%，税点额来源和纯度是保证培养液质量的中药因素，已有实验证实，胚胎发育能力与培养液质量呈相关关系。可以购买超纯水火灾实验室制备超纯水，蒸馏水制备过程中存在一些干扰物质，比如用玻璃蒸馏装置，可能析出有害的离子，一般蒸馏水还可能含有致热源，为保证培养液的质量，错采用Millipore-Q水纯化系统，在水质很差的地方，则宜先用蒸馏法生产初步纯化的水源，再经Millipore-Q系统处理提供合格的超纯水。

实际工作中所有与配置培养液相关的器皿，如烧瓶，量筒。药匙，吸管等除符合胚胎培养要求的一次性用品外，都应该先用超纯水清洗，在经过120℃干烤灭菌后方可使用。

自制的超纯水需要常规检测的主要污染物包括；微生物含量、致热源、内毒素、PH值、电阻、可溶性硅酸盐及有机污染物。检测指标包括最大菌株量不超过10个集落形成单位（CFU/ml),最小电阻10mohm/cm，以及内毒素水平不超过0.125u/ml。

2、电解质 IVF培养液的溶质构架是平衡盐。典型培养液包括钠、钾、氯、镁及磷酸盐。因为培养液中美中元素的含量并不多。数量准确和高纯质量至关重要。多数文献建议使用分析纯或细胞培养级试剂。IVF培养液的电解质组成对卵细胞及胚胎细胞内的离子水平有重要的影响，从而影响到细胞功能的调节。除影响生理功能以外，培养液中的电解质，特别是NaCl，是构成渗透压的主要来源，常规胚胎培养液的渗透压是275-295mOsmol/L,常规培养液选择的范围为284-286mOsmol/L、

3、能源物质——碳水化合物 碳水化合物存在于女性生殖道的体液中，其浓度水平在输卵管和子宫腔中不同，并且随着生殖周期的变化而改变。母体基因控制的早期胚胎主要以丙酮酸盐-乳酸盐为能量来源，随着胚胎的发育，胚胎基因组激活后，则以葡萄糖为主要能量来源。受精液中葡萄糖至少为2.78mmol/lL，以保持精子的活力。

培养液中高浓度的葡萄糖使卵裂期胚胎发育变慢或发育阻滞，不过，葡萄糖在磷酸盐存在时，这种抑制作用可以被氨基酸、EDTA或维生素削减。氨基酸、维生素或EDTA在含葡萄糖和磷酸盐的培养液中的添加有助于防止呼吸和代谢控制的丧失。胚胎也因此能够为进一步的发育保持更加正常的代谢和充分的ATP生产。更值得注意的是致密期后胚胎的培养液中缺乏葡挞唐导致胚胎向囊胚期发育的能力的受损及活力的丧失。贪睡化合物是着床前胚胎发育与代谢的主要能源。

IVF培养液中主要含有葡萄糖、丙酮酸和乳酸。除了能源作用以外，葡萄糖还是生物合成的主要前提，而丙酮酸也有抗氧化基的作用。

4、氨基酸 输卵管和子宫液体含有高浓度的游离氨基酸，卵子和胚胎对氨基酸有特异传输系统，并且维持着一个内源性氨基酸池。雌性生殖道内液体的特征是具有高浓度的丙氨酸、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、氨基乙酸、丝氨酸和牛磺酸。除牛磺酸以外，输卵管液中那些高浓度的氨基酸与Eagle`s中的非必需氨基酸的作用极为相似。氨基酸对着床前胚胎有重要的生理作用。1氨基酸是蛋白质物质生物合成的前体2氨基酸通过转化变成能源分子参与稀薄啊代谢3调节细胞能量代谢 4作为溶质维持渗透压平衡5有缓冲能力从而参与维持细胞ph6是细胞内抗氧化剂7螯合作用。对多种动物模型包括对人的研究表明，培养液中加入氨基酸有助于胚胎细胞的正常基因表达。氨基酸已经成为IVF培养液的重要组成成分，特别是序贯培养液系统，氨基酸的浓度与种类随胚胎发育不同阶段而异。

对集中哺乳动物胚胎的研究，如小鼠、大鼠绵阳和牛，都证明培养液含有特异性氨基酸提高胚胎向囊胚期的发育。非必要氨基酸和谷氨酸盐提高体外培养鼠胚的卵裂率、囊胚形成率和赋予率，且可减少2细胞器阻滞。

致密期后，非必需氨基酸和谷氨酸盐促进滋养外胚层的分裂，提高囊胚腔的形成和孵化。必须氨基酸在输卵管中的浓度很低，表现为减少体外培养胚胎的囊胚细胞数。这种发育的抑制可能归因于第一个4细胞发育期，组成培养液中一定浓度的必需氨基酸的不良影响。不过必须氨基酸可显著提高8细胞期后胚胎的分裂率，促进囊胚内细胞团的发育。Bavister等通过研究大鼠胚胎在单一氨基酸中的发育发现，按冬氨酸、天冬氨酸盐、氨基乙酸、组氨酸、丝氨酸和牛磺酸醋精体外培养的大鼠受精卵向囊胚的发育，而半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸等起抑制作用。所有的一致性氨基酸都存在Eagle`s的必须氨基酸中，而促进大鼠胚胎发育的氨基酸除了组氨酸都存在Eagle`sa的非必须氨基酸中。

胚胎致密期前使用非必需氨基酸和谷氨酸盐还可防止胚胎内单个细胞结构的过分单一化。在致密化之前，每个细胞与外部培养液直接接触，而致密期后的胚胎通过转运上皮调节器内部环境。此外，以证实致密期转运上皮的形成标识者胚胎对抗酸符合的调节能力。除了促进培养陪她的发育，也有报道证实氨基酸提高几个五种的体外培养胚胎移植到受体后的活力。

由于氨基酸在溶液中能自发脱氨基，所以含氨基酸的培养液只能在有限的时间内培养以防止铵达到毒性浓度。因此培养液一般37℃培养2-3天。另外，需要注意的是，含有氨基酸的培养液必需保存在2-8℃。

5、大分子蛋白 雌性生殖道中的胚胎暴漏在各种各样的大分子中，如白蛋白和葡萄糖氨聚糖。胚胎在体内为宜没有接触过的大分子是血清。以前，常常使用血清与20%氧气仪器组成一个完整的胚胎培养系统。研究发现血清以集中方式损害植入前哺乳动物胚胎的发育。通过分析小鼠、绵阳和牛的胚胎。发现体外培养液中的血清会改变从受精卵体外培养而来的囊胚的形态、代谢、基因和超微结构。培养液中含有血清与囊胚移植后异常大羔的出生相关。这些数据引起广泛的关注，通过血清传递的这些有害影响的机制认识研究的热点。不过也有研究认为，绵阳胎儿过大可能与胚胎培养中许晴中氨基酸的浓度有关。

白蛋白是雌性生殖道含量最丰富的蛋白。配子和胚胎表面的电荷使他们易粘附在玻璃或塑料上，大分子的添加，如血清掰断白，可防止配子和胚胎的粘附。大分子通过改变表面张力使我们已于对配子和胚胎惊醒操作。次阿瓦，白蛋白可消除毒素的作用维持交替渗透压，尽管血清白蛋白都是一个相对纯化的片段，依然存在脂肪酸和其它小分子的污染，是生物污染的一个坑你的来源。不过，一经发现重组白蛋白在支持体外受精、体外胚胎发育及随后的妊娠上的作用等同于血清白蛋白，且不含感染性蛋白质、毒素等，从组人白蛋白添加还可增加胚胎的细胞耐受性。因此充足白蛋白具有关阔的应用前景。、

葡萄糖氨聚糖和蛋白聚糖也是输卵管和子宫液的主要成分，根据着床生殖道中透明置酸水平增高的生理现象，可以用葡萄糖氨聚糖透明质酸盐代替许晴添加到培养液中。Gardner等的研究表明，在含有白蛋白的培养液中加入透明质酸有意于胚胎发育病提高胚胎细胞耐冻能力。也有报道认为透明质酸有可能有助于某些患者的胚胎着床，从而挑个妊娠率。有研究发现仅在移植用培养液中添加透明质酸盐，就可增加胚胎的活力。

6、维生素 虽然很多中培养液中含有维生素，其作用还不是很清楚，可能培养液中各种组分之间有相互作用，例如，维生素与氨基酸有协同作用来防止代谢紊乱。B族维生素是碳水化合物与氨基酸代谢不可缺少的因素。所以，某些维生素可能在胚胎发育中起重要作用、

7、缓冲系统 绝大多数培养液利用碳酸氢盐与二氧化碳缓冲系统来维持生理性PH在7.2-7.4.培养液中的碳酸氢盐要求二氧化碳培养箱提供5-6%的二氧化碳来维持这个特定的PH。所以碳酸氢盐/二氧化碳培养箱提供5-6%的二氧化碳来维持这个特定的PH。所以碳酸氢盐/二氧化碳系统的优点就是在这种特此能够条件下能够维持胚胎细胞在生理PH范围内。如果改变了条件。暴漏培养液于空气环境中，这个系统的不利一面是使培养液的PH快速升高从而可能算还胚胎细胞正常生长发育。剞劂这个问题的办法之一是用矿物油覆盖培养胚胎的培养皿。如果将培养皿拿出培养箱观察胚胎或进行操作时，油层有助于减慢底层培养液的气体交换从而延缓PH升高的速度。然而有些操作不适于采用碳酸氢盐缓冲系统比如取卵、捡卵的过程，以及需要相对长时间在培养箱外操作的时候，比如单精子注射等显微操作时，就不宜采用碳酸氢盐缓冲系统。通常解决这个问题的办法使用HEPES来取代碳酸氢盐，这样使培养液在空气条件下保持PH值的相对稳定。