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食源性致病菌ELISA检测

点击次数:1228次     发布时间::2015/8/10 13:59:44

 食源性致病菌ELISA检测
ELISA试剂盒

世界卫生组织将食源性疾病定义为“凡是通过摄氏而进入人体的病原体,使人体患感染性或中毒性疾病,统称为食源性疾病”。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善,以及抗生素的康永,人类对病菌的抵抗能力却在不断下降,食源性疾病一直呈上升的趋势。因此,对视频中致病菌的检测和检验也就越来越现实其重要性,常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定视频是否收到此微生物的污染,这些方法需要一定的培养时间,少则2-3天,多至数周,才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间,提高微生物检出率,做到快速、简便、准确。免疫测定法,就因其准确性、特异性、使用范围宽,检测熟读快及费用低的特点,成为检验中广泛应用的方法之一。

沙门氏菌是引起食物中毒的中药病原菌。在世界各国的各类细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。在英国,就以沙门氏菌占首位,美国则为第二位仅次于金黄色葡萄球菌,日本则以溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌为最多,沙门氏菌占第三位。我国内陆地区也是以沙门氏菌为首位,世界上最大的仪器沙门氏菌食物中毒是1953年瑞典由吃猪肉而引起的鼠伤寒沙门氏菌中毒,7717人中毒,90人死亡。

沙门氏菌广泛分布于自然界中,而且种类多,至今已有2000种以上,的许晴型被发现。因此食物受到沙门氏菌污染的机会很多,易受污染的食品种类也很多,包括生畜、禽、蛋、奶、鱼、虾、贝类制品等。另外,在耨写环境条件下豆制品、水、糕点、以及食品加工摄氏表面也可检出,所以沙门氏菌日益引起人们的高度重视,视频中的沙门氏菌的检验也显得非常重要,沙门氏菌的检测方法也是世界各国研究最多的,因此沙门氏菌的检测方法相对于其他致病菌也是最多的。

ELISA试验中应当注意以下事项:

ELISA残留物测定的视频样品十分广泛,包括动物体液(如乳汁)、各种动物的肌肉组织和内脏组织以及常见各类食品等均可经过提取目标物如;农药、兽药、致病菌、病毒等的的抗体获抗原成分进行检测。有些标本可直接进行测定或使简单的离心、稀释(如;牛奶),有些则需经过梨花方法提取(如;动物组织和内脏中的兽药检测。)检测样品应保证新鲜,经前处理的提取液应及时进行ELISA检测,时间越长,提取液中的抗原的小家越低,如不能及时检测,应放4℃冰箱保存。应尽量防止细菌污染,因菌体中可能有内源性HRP,可能导致假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的HRP可发生聚合,在间接法ELISA检测中可使本底加深,所以标本如需保存做多次检测,宜采用少量分装冰箱保存,组织样品若不及时做前期处理,应放-15℃冰箱保存。

严格按实际和说明书的要求准备试验中需要的试剂。ELISA检测中应采用蒸馏水或去离子水洗涤用水应新鲜和高质量。自配的缓冲液应用PH计测量校正。从冰箱取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次实验不许用的部分及时放回冰箱保存。

ELISA家养步骤中,应将所加物加在ELISA板孔的地步,避免加载孔壁尚不,病注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中,每次加标本应跟换吸嘴,以免发生交叉污染,加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量掇刀加液器,使加液过程迅速完成。

在视频检测中,检测物抗原因分子量较小,一般采用竞争法对抗员进行检测。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即家标本,抗体和加酶结合物后,ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面发生。以抗抗体包被为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并非都有均等的和固相抗体结合的机会,只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触,这是一个逐步平衡的过程,需经扩散才能达到反应的终点。此乃ELISA反应总是需要一定时间温育之原因。

温育常采用的是4337℃、室温和4℃等。37℃是试验中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法做反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速抗原抗体放映,可提高反应温度,有些实验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。实际上,抗原抗体反应在4℃条件下更为彻底,在放射免疫测定中多使抗原抗体反应在冰箱中过夜,已形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在食品安全ELISA检测中一般不予采用。

保温的方式除有elisa仪器附有特制的电热快外,一般采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板应贴着睡眠,使温度徐苏平衡。为避免蒸发,班上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒中。ELISA试剂盒

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