巨细胞病毒（CMV)感染能对婴儿和器官移植手术后病人造成很大危害，为寻找快速，敏感的检测方法，及时对感染作出诊断，我们制备出供E.LISA用的CMV冻化及甘氨酸提取抗原。

抗原制备：冻化抗原制备：用AD-169株病毒感染人胚肺二倍体细胞（2BS）株，病变到80%以上时，倒掉细胞维持液，加入一定量PH7.2磷酸缓冲盐水，反复冻化三次，离心后上清液即为抗原，甘氨酸提取抗原制备：感染细胞方法同上，当病变达80%以上时，倒掉细胞维持液，加入一定量PH7.2磷酸缓冲盐水，倒点细胞维持液，每克氏瓶加入ph9.0的甘氨酸-氢氧化钠缓冲盐水7.0ml，挂掉细胞，超声波处理后，3000rpm离心15分钟，上清液即为试验用抗原，冻化及甘氨酸提取抗原的对照抗原用同一方法制备，但使用未感染病毒的正常2BS细胞。本实验的参考抗原为美国产AD-169株冻化抗原3--101J及正常细胞对照抗原3--102.

血清标本：为北京地区献血员及孕妇的血清。

ELISA间接法测定血清CMV特异性抗体：冻化和甘氨酸提取及参考抗原30-101J分别用PH9.6的碳酸盐缓冲液1:50及1:100稀释，包被40孔聚苯乙烯塑料板（上海市塑料三场），每孔0.1ml，置4℃过夜，三种抗原的正常细胞对照抗原用相同发发稀释及包被塑料板。待检血清1:50起做4倍稀释，每个稀释度许晴分别为加2个抗原及正常细胞对照抗原，实验操作方法按文献，结合物为辣根过氧化酶标记的羊抗人IgG，底物为邻苯二胺，在492nm读取OD值，以待血清OD值比阴性对照高2倍的血清稀释度为重点低度。

CMV冻化及甘氨酸提取抗原用于ELISA法检测人血清特异性IgG抗体比较：152份健康成人血清随意分成3组，分别用我们制备的冻化及甘氨酸提取抗原与参考抗原30-101J检测血清CMV特异性IgG抗体，结果见表。

三种抗原测定血清CMV特异性IgG抗体结果

 

从表可见，冻化及甘氨酸提取抗原与参考抗原3--101J检测血清，CMB特异性抗体结果科比。三种抗原同时测定同一地区相同条件下的人群CMV特异性IgG抗体的阳性率是一致的，冻化抗原为94.4%;甘氨酸提取抗原为91.3%；参考抗原30-101J为94.2%；抗体滴度分布已很一致，抗体滴度介于1:800-1:3200的百分率，冻化抗原为61.1%；甘氨酸提取抗原为56.5%；从图一可见三种抗原测定血清CMV特异性IgG抗体时，抗体滴度分布是一致的。

由于做补体结合试验时，甘氨酸提取抗原的敏感性明显高于冻化抗原，krishna等。也指出0.1M甘氨酸-NaOH-0.1M NaCL缓冲盐水提取的抗原测定人许晴CMV特异性IgG和IgM抗体，获得有意义的结果。考虑到同一种抗原用于集中不同实验中的方便性，我们进一步用甘氨酸提取抗原及参考抗原30-101J在同一试验条件下，测定55份北京地区孕妇许晴中CMV特异性IgG抗体，两种抗原测得的抗体滴度的相关性结果见表2

从图2中可见55份孕妇血清，用2中抗原，同时测定CMV特异性IgG抗体，每份血清抗体的对滴度相当一致。滴度完全一致的有42份，占总血清数的76.3%；其余13份许晴滴度虽不一致，但相差值一个许晴稀释度。

我们曾用高速离心方法提纯浓缩病毒，这样制备的抗原用elisa法测定血清CMV特异性抗体时，结果与参考抗原390-101J一致，但制备抗原需高速离心机等设备，而冻化抗原制备方法简便，适用于补体结合试验及ELISA试验，则更具有推广使用价值。