植物的组培技术现代农业及科研领域越来越广泛，他可以对生产脱毒种苗及快速的育种。目前应用较为广泛，组培技术可以分为普通茎尖培养和茎尖分升组织培养两种类型。普通茎尖培养是指较大的茎尖（几毫米乃至几时毫米）、牙尖及侧芽的培养，其主要是通过腋芽增殖和反复继代培养来获得大量无性繁殖材料。这种方法技术简单，操作方便，易于成活，繁殖速度快，且在繁殖过程中可以保持遗传的稳定性，因而广泛应用于利用常规方法难以繁殖的蔬菜作物的快速繁殖及种质资源的保存。茎尖分生组织培养是指利用位于顶端生长追去锥区长度不超过0.1mm的茎尖分生组织为外植体的离体培养。研究表明，在茎尖分生组织部位几乎不存在病毒，因此利用茎尖无病毒区域惊醒离体培养可以减少乃至消除植物体内的病毒，使之恢复种性，提高产量和品质，目前这种方法在马铃薯、大蒜、石刁柏、草石蚕中以得以广泛应用。

实验材料的准备：

进行精简培养快速繁殖时，可从大田种植的蔬菜作物中切取2cm左右的顶芽，进行茎尖分生组织脱毒培养时实验材料可小些（1cm左右），侧芽、休眠芽也可作为接种材料。将采到的试材流水冲洗后，用75%乙醇浸30s，再用0.1%氯化汞或其他消毒剂浸泡一定时间一杀灭试材表面的各种微生物（常用消毒剂及使用效果见表1-1),再用无菌水冲洗3-5次，即可完成消毒过程。如果进行普通茎尖培养，外植体一大些为好，一般切取0.5-1cm长的茎尖甚至整个芽；如惊醒茎尖分升组织脱毒培养，外植体则尽量小些，通常在解剖镜下剥去细叶及叶原基，将生长点暴漏，然后切取0.1-0.2mm长的部分作为培养材料。从去除病毒的角度看，培养材料越小脱毒效果越好，但外植体越小，

 

培养难度越大，或者时间越长（有的需要1年甚至更多的时间），一次应综合两方面的因素，根据病毒种类来决定培养材料的大小。

接种于培养

培养材料制备好以后，即可将其接种在培养基上建立起离体培养体系。

茎尖培养多以MS培养基为基本培养基，或以此为基础稍加修改，White、B5等培养基也常用于精简培养，培养基中通常以蔗糖为碳源，糖浓度一般为3%，浓度过低或过高时生长受到抑制。培养基中的各种生长调节剂是建立培养体系的关键，其中起主要作用的有细胞分裂素和生长素两类。细胞分裂素可促进细胞的分裂和分化，诱导不定芽形成，也有助于结局顶端优势，促进芽萌发，在茎尖快速繁殖中必不可少。常用的细胞分裂素有BA(6-苄基腺嘌呤）和激动素（KT)。对于某一些作物，适宜的细胞分裂素种类及浓度可能有所不同，如阿油菜豌豆，菜心等蔬菜快速繁殖时，通常用BA,而莴苣则以KT效果为好。近年来研究指出一些新的具细胞分裂素活性的生长调节剂在快速繁殖中也有良好的效果.如TDZ(Thidiazuron,噻重氮苯基脲）具有很高的细胞分裂素活性，在极低浓度下即可有效的促进腋芽增殖。生长素类物质如IAA.IBA.NAA.2，4-D等，具有醋精新梢生长的显著作用，并可诱导外植体产生愈伤组织和生根。在多数情况下外缘生长素并非茎尖增殖所必须，但往往浓度的生长素与细胞分裂素配合可以达到醋精芽增殖、提高繁殖系数的效果（Ebida,1993)。不沟通作物中细胞分裂素与生长素配合的种类和浓度哟所不同，在百合茎尖分升组织培养时，以MS+BA0.5-1.0mg/L+NAA0.5mg/L效果最佳，而无籽西瓜茎尖快速繁殖时，MS+BA0.25-0.5mg/L+IAA1mg/L时芽增殖数增多，发芽真长而稳定。

茎尖培养中通常加入琼脂起固化培养基的作用，而Norris在培养马铃薯镜监视发现滤纸桥液体培养能使茎尖生长健壮且发育早，增殖效果良好。Walket（1980）在橄榄分升组织培养时也应用滤纸桥方法从而使外植体植株可以每周增加3.8倍的速度增殖。此外，在培养基中加入椰乳等天然物质，也可以促进马铃薯、草莓等茎尖的生长和增殖。

接种后经培养基置于培养是或培养箱中进行培养，每日光照12-16h，照度1500-3000lx即可。培养室温度通常维持在25±2℃，并可以根据不同植物种类调整至其生长最适温度。

茎尖分生组织培养，从培养到植株再生约需6个月至1年甚至更长时间，由于培养时间较长，培养基有时会失水干燥，因此要定期转移培养体病注意培养基保湿。

生根与移栽

增殖的新稍要经过诱导生根阶段长出正常根系，才能形成再生植株。一般来讲，茎尖外植体在原有的培养基上难以生根，必须转移到新的生根培养基。对于大多数植物，低盐培养基有利于生根，如果茎芽增殖在全强度MS培养基上进行，生根时盐浓度应减到1/2,或1/4。减少蔗糖浓度（大约1%）和增加光强度（增至（3000-10000lx）也可促进根的发育（Ezura等1993)。有些蔬菜作物的新稍可以再无激素培养基中生根，但对于大多数蔬菜，诱导生根需要加入适当的生长素，常用语生根的生长素有IAA、IBA或NAA,其应用浓度因蔬菜种类及诱导生根方法不同而异。

当新稍长至0.1-1cm高时，将其切下，出去根部愈伤组织，转入生根培养基中进行培养，即诱导星峰根系。也有研究指出，将新稍基部在50-100mg/L IBA溶液中处理4-8h，或含有生长素的培养基中培养4-6H后，再将新稍转移至无激素培养基，更有利于幼根的形成和生长。

在生根培养基上培养3-4周，待新稍形成健壮而发达的根系后，即可移栽出瓶。移苗前，应将培养瓶盖打开，并向瓶中加入少量水，炼苗1-2d，然后将以生根的小植株小心取出，仔细洗净根部培养基，植入装有灭菌培养基质（通常为蛭石与沙）的营养钵中。诶防止移栽后根部杂菌感染，可在移栽前用1%代森锌浸润3-5min。移栽后要用玻璃杯或塑料播磨覆盖，以保证小蜘蛛周围的相对湿度在90-100%，移栽10d后，可适当揭开覆盖物，逐渐增加气体交换，直至完全去除覆盖，小植株即可成活。移栽初期，要用清水浇灌以防因兔绒溶液离子浓度过高造成生理干旱，且应给以较低的温度（16-20℃）和较弱的光照，待小植株有了新的生长时，在提高移栽成活率。
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