高效液相色谱法中流动相的选择
在液相色谱中，可供选择的流动相的范围较宽，且还可组成多元溶剂系统与不同配比，在固定相确定后，流动相的种类、配比、ph值及添加剂等能显著影响分离效果，因此HPLC中流动相的选择至关重要。
（1）液-固吸附色谱的流动相：在液-固吸附色谱法中，流动相对分离的影响比较显著，控制分离选择性和分离速度主要靠选择合适的流动相来实现。一般采用二元以上的混合溶剂系统，在低级性溶剂如烃类中，加入是两极性溶剂如三氯甲烷、春蕾等以调节溶剂系统的极性。
（2）化学键合色谱的流动相：可采用固定比例（等度洗脱）或按规定程序改变比例（梯度洗脱）的溶剂组成作为流动相系统，在液-固吸附色谱法中，一般采用二元以上的混合溶剂系统，在低级性溶剂如烃类中，加入是两极性溶剂如三氯甲烷、醇类等以调节溶剂系统的极性；在液-液分配色谱法中，流动相极性较小于固定相极性称为正相色谱；流动相极性大于固定相极性称为返现色谱。正相色谱用于分离极性及中等极性的分子型化合物；返现色谱用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。在药物分析中，反省色谱应用最广。在反相色谱法中，由于固定相是非极性的，所以，流动相极性越弱，其洗脱能力越强。典型的反相色谱法是用非极性固定相，常用十八烷基键合相（ODS或C18),流动相用甲醇-水或乙腈-水。洗脱时，极性打的组分线流出色谱柱，极性小的组分后流出色谱柱。由于C18键在水相环境中不易保持伸展状态，故对于反向色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不低于5%。否则C18键的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。
反向键合相色谱的流动相常选用下列三种：1 部分含水溶剂；以水为基础溶剂，在加入一定量可与水互溶的有机极性调节剂（如甲醇、乙腈、四氢呋喃），适用于分离中等极性、弱极性药物、常用甲醇-水、乙腈-水系统。2 非水溶剂：用于分离疏水性物质，尤其在柱填料表面键合的十八烷基硅胶量较大时，固定相对疏水化合物有异常的保留能力，需要有机溶剂，可在乙腈或甲醇中加入二氯甲烷或四氢呋喃（称非水反相色谱）。3缓冲溶液；适用于可溶于水病可解离的化合物，如蛋白质、多肽及弱酸、弱碱类成分。缓冲液及其PH值不同会影响组分的保留值，常用的缓冲液有三乙胺磷酸盐、磷酸盐、醋酸盐溶液，选用的ph值应使用溶质尽可能成为非解离形式，使固定相有较大保留能力（反向离子抑制色谱）。
争相键合相色谱的流动相通常采用饱和烷烃（如正乙烷）中加入异丙醚等极性较大的溶剂作为极性调节剂，通过调节剂的浓度来改变溶剂强度，常采用二元以上的混合溶剂系统，可用薄层色谱（TLC）探索合适的流动相。
返现离子对色谱的流动相为极性较强的水系统混合溶剂，最常用的是甲醇-水、乙腈水中加入0.003-0.01mol/L的离子对试剂，调节有机溶剂的比例使组分K值在适宜范围。离子对试剂的性质和浓度、流动相的PH值及流动相中有机溶剂的性质和比例都会影响组分的保留值和分离的选择性。
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