染色方法有哪几种
蛋白质-DNA染色法
试剂 碘化丙啶100ug/ml，FITC 50ug/ml，PBS-EDTA：含EDTA 174mg/ml的PBS。RNA酶1mg/1ml，需加热至90℃以上30分钟去除DNA酶。
操作步骤 取70%冷乙醇固定的细胞（至少固定12小时以上）1—2×106/ml，离心，用PBS洗一次，加RNA酶100ul，37℃消化30分钟。加1ml PBS-EDTA液，及FITC20ul，混匀，避光，置室温中5分钟，加PI 1ml，混匀。避光，置室温中10分钟后上机测定。
吖啶橙（AO）染色法
注意事项 所用AO必须是Polysciences CO.产品，AO浓度应在5—16ug/ml。推荐用以70%冷乙醇固定的小鼠胸腺细胞为标准样品。以确定不同型号FCM需用的最佳AO浓度。以RNA为横坐标，DNA为纵坐标时最佳图型应呈～型，上、下线应平行，不倾斜。凡测试标本前先以小鼠胸腺标本检验仪器状态。
AO染液易污染管道，每次实验结束后需用漂白粉或清洁液冲洗管道，再用蒸馏水生理盐水长时间冲洗，以使AO染液冲洗净。
免疫抗体标记与DNA双染色法
操作步骤 血或骨髓用比重为1.077g/ml淋巴细胞分层液分离单个核细胞。如分层后仍含有较多的红细胞，则可用0.83% NH4CI溶液，以3倍于细胞悬液量，15℃混匀15分钟。或用蒸馏水溶解30秒钟后立即加2倍量的1.8%生理盐水以去除红细胞。免疫标记的标本应含90%以上的活细胞。调整细胞浓度至1×107/ml。取50ul细胞悬液加第一抗体，混匀后置4℃30—60分钟。用PBS洗细胞2次。再加第二抗体，混匀后置4℃ 30—60分钟再用PBS洗细胞2次，加入约1ml PBS，即可上机测定。或将细胞固定于2ml 70%冷乙醇或0.5%多聚甲醛。避光保存于4℃。荧光强度可保持10天不衰老减。标记后的新鲜细胞或固定细胞均可再用RNA酶100ul（1mg/ml）于37℃中消化30分钟，加PI 1ml（100ug/ml）混匀，10分钟后上机检测。
DNA与ras基因蛋白检测法
取1.5×106细胞，固定于1ml 100%冷甲醇中，充分振摇后置于—20℃至少10分钟。离心沉淀，弃上清液。用不含钙、镁的HBSS或PBS洗细胞一次，离心，弃上清液、留约50ul。再加50ul PBS（含1%牛血清白蛋白）及1%羊血清，混合后置室温中30分钟。加50ul抗ras MoAb（用含1% BSA的PBS，1：98稀释）。混匀后，置冰上30分钟。用PBS洗两次。留约50ul上清液，加50ul FITC-兔抗大鼠抗体（该抗体需用PBS作1:10稀释），混匀后，置冰上30分钟。用PBS洗两次，加250ul RNA酶（500u./ml）混匀，置37℃避光保温30分钟，再加250ul PI（50ug/ml）混匀，10分钟后上机测定。或可加第三抗体，即FITC标记的羊抗兔抗体，以增强FITC荧光强度。
PCNA与DNA双染色法
1×106细胞，用1%多聚甲醛及20ug/ml Lysolecithin PBS 1ml固定2分钟。立即离心沉淀（5000rpm，1分钟），弃上清液，轻轻振荡沉淀物。加100%甲醇1ml，置—20℃5分钟，离心沉淀，弃上清液。加含0.1% NP40的PBS 1ml，混匀，置冰上5分钟。加第一抗体200ul（PCNA以PBS 1:100稀释）。对照用Coulter IgG 5ul加PBS 195ul，混匀，置室温10分钟。离心沉淀，加第二抗体FITC-羊抗鼠IgG 200ul混匀放置10分钟。离心沉淀，加PI 500ul（50ul/ml），1000u RNA酶，混匀后置室温20分钟后测定。
