果实中有机酸的测定-HPLC法

 

    果实中的有机酸有草酸、乙酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸等。乳痈常规的酸碱滴定法，虽然可测出总算量，但对各成分酸的含量则无法确定，若采用液相色谱法（HPLC）则可解决此难题。

     液相苏测有机酸是利用有机酸在化学合C18固定相与2%NH4H2PO4的流动相分配系数之间的差异而进行分离后，再经紫外检测器或示差吸光检测器而检出，定性可根据色谱曲线的保留时间，定量可根据色谱峰面积或峰高，利用外标法计算而得。

试剂和仪器 夜宵液相色谱仪，告诉离心机，0.45nm唯恐过滤膜，10ml进样器。NH4H2PO4496%乙醇，0.01mol/NaOH及200ppm标准有机酸.

试验步骤

1、样品的处理 5-10g样品用80%乙醇25ml于75℃水浴中提取15min，冷后离心，收集煽情也，沉淀10ml80%乙醇洗两次，江上清液收集在一起，zui后用80%乙醇定容至50ml取5ml蒸发至干（在75℃下），残渣用5ml流动相溶解。共色谱测定用。

2、标准溶液的配制  取200ppm的原液0.5、1、2、3、4ml，用流动相稀释至5ml混匀后共色谱测定用。

3、色谱测定

固定相：化学键合C18

流动相：2.5%NH4H2PO6(PH=2.8)

流速：1ml/min

进样量10ul

检测器：紫外检测器（214nm），0.1AUFS

以峰高或峰面积做标准曲线，从标准曲线上查找出有机酸浓度求算出有机酸含量。