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细菌培养基和抗生素

点击次数:1556次     发布时间::2015/7/20 11:41:30

细菌培养基和抗生素

LB培养基
配制每升LB(luria-bertani,LB)培养基,应在950ml双蒸水加入;细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tuyptone)10g,细菌培养用酵母提取物(bacto-yeast extract)5g,NaCl 10g。摇动容器直至溶质完全溶解,用5mol/L NaOH(约0.2ml)调节PH值至7.0,加入双蒸水至总体积为1L,在13Ibf/in(1.0354x10pa)高压下蒸汽灭菌20min。
(二)含有琼脂或琼脂糖的培养基
先按上述配制液体培养基,高压灭菌前加入下列试剂中的1份;细菌培养用琼脂(Bacto-agar)15g/L(铺质平板),琼脂糖7g/L(配制顶层琼脂糖用)。
在15Ibf/in(1.034x10Pa)高压下蒸汽灭菌20min。从高压灭菌器中取出培养基时应轻轻旋转以使溶解的琼脂或琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中。注意,此时培养基溶液可能过热,炫动液体会发生暴沸。应使培养基降温至50℃,方可加入不耐热的物质(如抗生素)。为避免产生气泡,混匀培养基时采用旋动的方式,然后可直接从烧瓶中倾除培养基铺制平板。90mm制直径的培养基皿约需30-50ml培养基。如果平板上的培养基有气泡形成,可在琼脂或琼脂糖凝结前用本生灯灼烧培养基表面以除之。按设定的颜色记号在相应平板的边缘做标记以区别不同的培养平板。
培养基完全凝结后,应倒置平皿并贮存于4℃备用。使用前1-2h应取出贮存在平皿。如果平板是新鲜制备的。在37℃温育时会发汗,从而导致细菌可控或噬菌体噬癍在平板表面交互扩散而增加交叉污染的机会。为了避免这一问题,可以拭去平皿内部的冷凝水并把平皿倒置于37℃温育数小时方宇使用,也可快速甩一下平皿盖一出去冷凝水已尽可能减少污染的机会,除去盖上的水滴时应把开盖的平皿倒置握在手上。
保存培养基
细菌可以再穿刺培养物中保存2年之久火灾甘油的培养物中无限期保存
穿刺培养物
使用容量为2-3ml并带有螺口旋盖和橡皮垫圈的剥离小瓶,加入相当于2/3容量的融化LB琼脂,旋上盖子,但不拧紧,在15x10Pa高压蒸汽下灭菌20min。从高压蒸汽灭菌器中取出剥离试管,冷却至室温下宁晋盖子。房事问保存备用。
保存细菌时,用一灭菌的接种针挑取分散良好的单菌落,把针穿过琼脂直达瓶底数次,盖上瓶盖并与拧紧,在瓶身和瓶盖上均做好标记,室温下存放于暗处(普通的做法是将瓶盖放松,在适当温度下培养过夜,然后拧紧瓶盖并加封Parafilm膜,于室温(做好于4℃)避光保存。
含甘油的培养物
在液体培养基中生长的细菌培养物;取0.85ml细菌培养物,加入0.15ml灭菌甘油(甘油应在15x10Pa高压蒸汽下灭菌20min)振荡培养物使甘油分布均匀,然后转移到标记号的、带有螺口和空气密封圈的保存管内,在乙醇-干冰或液氮中冻结后转至-70℃长期保存。
复苏菌种时,用灭菌的接种针刮拭冻结的培养物表面,然后立即把黏附在接种针上的细菌划于含适当抗生素的LB琼脂平板表面,冻干保存的菌种管重置于-70℃,而琼脂平板于37℃培养过夜。
(2)在琼脂平板上生长的细菌培养无:从琼脂平板表面刮下细菌放入装有2mlLB的无菌试管内,再加入等量的含有30%灭菌甘油的LB培养基,振荡混合物使甘油完全分解均匀后,分装于带有螺口盖和空气密封圈的无菌试管中,按上诉方法冰冻保存、
抗生素如下
 

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