叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(比色法)
产品简介:
叶绿体(Chloroplast)是光合作用的细胞器,在光合作用研究中,常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作。叶绿体中所含的色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合,成为色素蛋白复合体,其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)。
叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(比色法)检测原理是叶绿素不溶解于水,而溶于有机溶剂,以有机溶剂粗提叶绿素,根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比,即A=αCL,其中α为比例常数,当溶液浓度以百分比浓度为单位,层液厚度为1cm 时,α为该物质的吸光系数。在本试剂盒情况下,叶绿素a和叶绿素b在 665nm、649nm处有最大吸收波,根据经验公式可计算出叶绿素 a、叶绿素b及总叶绿素含量。该试剂盒主要用于植物组织中叶绿素的提取以及定量检测叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品组成 | 规格 | Storage |
试剂(A): Chlorophyll Assay buffer | 500ml | RT |
试剂(B): 提取粉剂 | 3g | RT |
使用说明书 | 1份 |
自备材料:
1、研钵或匀浆器
2、离心管
3、滤纸或纱布
4、比色杯
5、分光光度计
操作步骤(仅供参考):
操作步骤(仅供参考):
1、叶绿素提取:
①取菠菜或其他植物新鲜叶片,洗净,擦干,去中脉,称取剪碎的新鲜样品 0.1g,置于研钵或匀浆器,加入少量提取粉剂(约 50mg)和 1mlChlorophyll Assay buffer,研磨或匀浆成液态。
②将研磨液或匀浆液转移至 10ml 离心管,用少量叶绿素提取液冲洗研钵或匀浆器数次,最后连残渣一同倒入 10ml 离心管,补加 Chlorophyll Assay buffer 至 10ml,混匀,避光放置 5min-2h。
③观察底部组织残渣接近于白色,即为提取完全,如果仍有较多组织颜色,应再加入Chlorophyll Assay buffer 继续避光放置。
④滤纸或三层纱布过滤,留取滤液,即为叶绿素粗提液。
2、分光光度计测定:取叶绿素粗提液加入光径为 1cm 的比色杯,以 Chlorophyll Assay buffer 调零,测定粗提液在 665nm、649nm 处吸光度(A665、A649)。
计算:
叶绿素 a 含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)
叶绿素 b 含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)
总叶绿素含量(mg/g)=CT×V×N/(W×1000)
式中:Ca=13.95×A665-6.88×A649
Cb=24.95×A649-7.32×A665
CT=6.63×A665-18.07×A649
V=叶绿素粗提液体积(ml)=10(ml)
N=稀释倍数
W=样品鲜重或干重(g)
注意事项:
1、 为了避免叶绿素见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2、 测定吸光度值大于 1 时,可适当稀释后再行测定。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。