动物、植物、微生物
乙酰辅酶 A 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶 A 汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于 ATP 合成。此外，乙酰辅酶
A 是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
测定原理
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶 A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶 A 含量的高低。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：液体 10μL×1 支，4℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加入 22.5mL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.92 m L），将试剂二、三和四按
照 1:1:90 的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定 24 样）；加样前置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴锅中预热 30 min；现配现用；
乙酰辅酶 A 的提取
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
APX 活性计算公式：
(1) 按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(μmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d）×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T
=1.79×△A÷ Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：每 g 组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。 APX(μmol/min/g 鲜重 ) = △A÷(ε×d）×V 反总×106÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=1.79×△A ÷W
ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。
注意事项：
配制好的试剂二 4℃保存，并且 3 天内使用完。
