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蛋白质的浓缩、干燥及保存

点击次数:1690次     发布时间::2015/6/1 13:57:45

                                                                                           蛋白质的浓缩、干燥及保存
1、样品的浓缩
生物大分子在制备过程中犹豫过柱纯化而样品浓度变得很稀为了保存和检定的目的,旺旺需要进行浓缩。先介绍接种常用的浓缩技术。
(1)透析袋浓缩法:利用透析浓缩蛋白质溶液时应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(炭蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。可以将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白质液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,认可再用。
(2)冷冻干燥浓缩法:这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,她即使蛋白质不易变性,又可保持蛋白质中固有的成分。他是将蛋白质在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白质液在低温下冰冻,然后移置于干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH,CaCL2和硅胶等)。密闭,迅速抽空,并维持再抽空状态,数小时后即可获得有大白纸的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用,也可以采用冻干机进行冷冻干燥
(3)吹干浓缩法:将蛋白质溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹,次方法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃
(4)超滤膜浓缩法:此法是利用唯恐纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的,有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤:另一种是将蛋白质液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。
(5)凝胶浓缩法:选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50将凝胶直接加入蛋白质溶液中,根据赶脚的吸水量和蛋白质浓缩需要浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶里自吸水后,通过离心除去
(6)浓缩胶浓缩法:浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克赶脚可吸水120-150ml他能吸收低分子量的物质,如水,葡萄糖、蔗糖、无机盐等,是和浓缩的分子量10000以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的会后率可达80-90%浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中杰克,必须注意,浓缩溶液的PH值应大于被浓缩物质的等电点。否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。ELISA试剂盒
2、干燥
为防止制备的生物大分子产品变质,时期一语保存,常需要干燥处理。最常用的方法是真空冷冻干燥。真空冷冻干燥适用于不耐高温,易于氧化物质的干燥和保存,之歌装置出宝库奥干燥器,冷凝器及真空干燥外,同时增加了温度因素在同压力下,水蒸气压随温度下降而下降,故在低温低压下,冰很容易升华为气体。操作时一般现将带干燥的液体冷冻到冰点以下使之变成固体。然后在低温低压下将溶剂变成气体而除去。此法干后的产品具有疏松,溶解度好,保持天然结构等优点,适用于各类生物大分子的干燥保存。
保存生物大分子的稳定性与保存方法有很大关系。干燥的制品一般比较稳定,在低温情况下其活性可在数日甚至数年无明显变化,贮存要求简单,只要将干燥的样品置于干燥器内(内装有干燥剂)密封,保存于0-4℃冰箱即可。业态贮藏时应注意以下几点:1样品不能太稀,必须浓缩到一定浓度才能封装贮藏,样品太稀易使生物大分子变性2一般需加入防腐剂和稳定剂,常用的防腐剂有甲苯,苯甲酸,氯仿,百里酚等蛋白质和酶常用的稳定剂有硫酸铵蔗糖,甘油等此外钙锌硼酸等溶液对某些酶也有一定保护作用。核酸大分子一般保存在氯化钠或柠檬酸钠的标准缓冲液中3贮藏温度要求低,大多数在0℃左右冰箱保存,。有的则要求更低,应视不同物质而定。ELISA试剂盒

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