过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
测定意义：
H2O2 是生物体内最常见的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化产生，由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面 H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子，。
测定原理：
H2O2 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、丙酮 60mL、浓盐酸 10mL、研钵和冰。
试剂的组成和配制：
试剂一：丙酮 60mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃ 保存；试剂三：15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：60mL×1 瓶，4℃保存；
H2O2 提取：
1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：
试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或
细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；用试剂一定容至 1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或
细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；用试剂一定容至 1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；转移至 EP 管中，用试剂一定容至 1mL，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂
| 试剂名称（μL） | | 测定管 | | 对照管 |
| | | | | |
| 样本 | | 吸取的量的为全部上清液 | | |
| | | | | |
| 试剂一 | | | | 1000 |
| | | | | |
| 试剂二 | | 100 | | 100 |
| | | | | |
| 试剂三 | | 200 | | 200 |
| | | | | |
| | 4000g，常温离心 10min，弃上清，留沉淀 | | ||
| | | | | |
| 试剂四 | | 1000 | | 1000 |
| | | | | |
加入试剂四溶解沉淀后，室温静置 5min，倒入比色皿中，测定 415nm 处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算ΔA＝A 测定-A 对照。
注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
H2O2 含量计算：
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.062x - 0.08(x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为ΔA)。
2、血清（浆）中 H2O2 含量的计算：
H2O2 含量（μmol/mL）＝(ΔA＋0.08)÷0.062=16.13×(ΔA＋0.08)
3、细菌、细胞或动物组织中 H2O2 含量计算（1）按照蛋白浓度计算
H2O2 含量(μmol/mg prot)=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(V1×Cpr)=16.13×(ΔA＋0.08) ÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。（2）按照样本质量计算
H2O2 含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(W ×V1÷V2)=16.13×(ΔA＋0.08) ÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
H2O2 含量(μmol/104)=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(500×V1÷V2)=0.032×(ΔA＋0.08) V1：加入反应体系中样本体
积，1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌
总数，500 万。
积，1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌
总数，500 万。
