石蜡包埋组织单细胞分散的方法和步骤
采用组织切片一胃蛋白酶消化法。1、将石蜡包埋组织块在切片机上切去40—50um的组织片。2、将组织片放入试管，加入3.0ml二甲苯脱蜡，一般在室温下脱1—2天。中间可换二甲苯一次，以确保石蜡脱净。检查石蜡是否脱净，可将二甲苯弃去，加入无水乙醇，如有白色絮状物浮起，表明石蜡未净。3、梯度酒精水化：分别以100%、95%、70%、50水化组织片，每步10分钟，弃去酒精，加入蒸馏水5ml漂洗1—2次，3—5分钟后弃去。4、胃蛋白酶消化：以生理盐水配制0.5%的胃蛋白酶，盐酸调pH值为1.5（新鲜配制，一周内为宜）。每个试管中加入胃蛋白酶消化液3—5ml，放入37℃恒温水浴锅孵育30分钟，每隔5—10分钟振荡一次。5、终止消化：消化后，立即加入生理盐水至10ml，离心沉淀1500rpm，5分钟，弃上清，再加入生理盐水漂洗，以100目尼龙网过滤，除去未消化完的组织片，以短时低速离心沉淀，去上清，加入冰冷70%乙醇固定，放冰箱备检。
石蜡包埋组织分散的单细胞悬液基本上以核为主，经形态学观察，核结构保持完好，有的细胞核周围仍残留部分胞浆（图1）。作者对消化前后的组织片进行了观察，发现消化前为实性团块的肿瘤组织，在消化后，实性团瘤细胞出现了一个个筛孔状结构。如胃的管状腺癌（图2），在消化后癌细胞从管壁脱落，仅残留管壁组织（图3），而周围间质成分的结构仍保持完好。从消化前、后的组织切片的观察结果，切片一胃蛋白酶消化法对石蜡包埋肿瘤细胞具有选择消化作用，这可能与癌细胞连结不紧密、易脱落有关.
石蜡包埋组织的切片厚度。会影响单细胞悬液的质量，也会影响流式分析结果。要获得较满意的单细胞样品，切片厚度在40—50um较适宜；脱蜡要干净；消化时间要掌握好，并采取有效的去杂质碎片方法。
