细胞周期参数的测定
测量细胞周期参数的传统方法是脉冲标记有丝分裂指数曲线法,即PLM法。但此法费时间,技术有丝分裂指数十分费工且需一定经验,由曲线得到周期参数通常还要用计算机拟合,这些都限制了该方法的使用。流式细胞术建立后,曾发展一种利用S时相内的窗口,测定每个细胞放射性的方法,由其曲线可得出群体的Tc和Ts。
假定群体内全部细胞都处在增殖状态,即增殖比为1,所有的细胞动力学均一,即每个细胞都以相同的速率通过各个时相。对这样的群体经【3H】-TdR脉冲标记30分钟后,再用DNA特异性染色,流式细胞计测定DNA直方图,如图中的b图。此图上S时相中间位置2是个分选窗口,对应细胞周期图a上S时相相应部分也用粗线标了出来。将此窗口内的细胞分选出来,测定其RC值。如果在标记后不同时间分选,或标记后不同时间收货细胞,固
定,染色,分别分选然后测定RC值,则可得图c中的实线,因为【3H】-TdR只是为S期细胞所掺入,故实线左边第一个峰宽为1/2Ts,但通常误差较大因而不用,第二个峰宽为Ts,上述两峰间的距离是Tco因为分选窗口定在S时相,故此方法称为RCSi方法。如果分选窗口在G1时相,如图b中窗口1,则称为RCG1,其相应示意图在c图上用虚线表示。

由于实际群体动力学参数不可避免的离散性,结果得到的实际曲线不可能是c图的样子而是图d中的圆点(RCSi)或方点(RCG1),这是CHO细胞实测的结果。为从这样一组数据中提取到动力学信息,必须用专门的计算机拟合程序分析,最后得出TG1、Ts和TG2M分别为2.4小时,6.5小时和1.6小时。
本方法中的窗口要求在与其他时相不重叠的位置,因而选在图b中“2”的位置。从原理上说,窗口应该窄一些为好,但窗口愈窄分选出足够细胞数量的时间相对长一些,从这个角度看起来,RCG1方法因G1期细胞多而集中,可能较RCSi为佳,但相应的数据分析方法略有不同。只是对仪器操作人员要求有较好的素质、较多的经验、操作要熟练,否则难以胜任。