抗坏血酸(Vc)测试盒说明书
一、试剂盒组成及配置(50T/48样)
试剂一:贮备液5mlx1瓶,4℃保存6个月。
试剂一应用液配制:用时按照试剂一贮备液:双蒸水=1:14稀释,混匀制备
试剂二:粉剂x1支,4℃保存6个月。
试剂二应用液配制:用时一支粉剂加0.36ml冰醋酸再加水至40ml,
溶解,4℃保存。
试剂三:白色结晶体粉剂x1支,4℃保存6个月。
试剂三应用液配制:因胶南溶解,用前2-4小时加95%乙醇或无水乙
醇60ml充分溶解,制备,4℃保存。
试剂四:黄色贮备液0.2mlx1瓶,冰箱4-8℃避光保存,贮存时间6个月。
试剂四应用液配制:用时取0.15ml试剂贮备液加水至25ml制备。现用现配
试剂五:液体6mlx1瓶,4℃保存6个月。
试剂六:Vc标准品:粉剂6mgx3支,每瓶内含维生素C,4℃保存6个月。
60ug/ml Vc标准品应用液的配制:将1支标准品粉剂溶于10ml试剂一应用液中,制备。
6ug/ml Vc标准品应用的配制:取60ug/ml Vc标准品应用液再用试剂
一应用液10倍稀释备用,现用现配。
注:维生素C标准品易氧化,因此最好在样本上清液制备好后在配标准,并在10分钟内进行检测。
二、操作过程:
1、上清液制备:取样本0.15ml加1号试剂0.45ml,旋涡混匀,放置15分
钟后离心,3500~4000转/分,离心10分钟,上层清亮液体为上清液。
2、上清液中Vc的测定:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | |||
试剂一(mL) | 0.4 | | | |||
6ug/ml Vc标准应用液(ml) | | 0.4 | | |||
上清液(ml) | | | 0.4 | |||
试剂二应用液(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |||
试剂三(ml) | 1 | 1 | 1 | |||
试剂四(ml) | 0.25 | 0.25 | 0.25 | |||
充分混匀,37℃水浴30分钟 | ||||||
试剂五 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分混匀,静置10分钟,波长636nm,1cm或者0.5cm光径,双蒸水凋零,测定各管吸光度值。