影响酶促反应的因素-温度、PH和抑制剂

酶作为生物催化剂与一般催化剂一样呈现温度效应。酶促反应开始时，反应速度随温度升高增快。达到最大反应速度时的温度称为某种酶的最适温度。由于绝大多数酶是又活性的蛋白质，当达到最适温度后，继续升高温度，引起蛋白质变性，酶促反应速度反而逐步下降，以致完全停止。

酶的最适温度不是一个常数，与作用时间长短有关。测定酶活性均在酶促反应最适温度下进行。大多数动物来源的酶最适温度为37-40℃，植物来源的酶最适温度为50-60℃。

酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内具有活性，酶活性最高时的PH，称为酶的最适PH。高于或低于此PH时酶的活性逐渐降低。

酶的最适PH不是一个特征物理常数，对于同一个酶，其最适PH因缓冲液和底物的性质不同而又差异。

在酶促反应过程中，抑制对酶的抑制作用可分为可逆抑制和不可逆抑制。可逆抑制有根据抑制剂和底物的关系分为三种类型；竞争性抑制，非竞争性抑制和反竞争性抑制。

实例如下：

一、试剂

5%三氯醋酸溶液。1mmol/L苯甲脒；称取19.25g苯甲脒，用少量水溶解，定容至100ml。

1%酪蛋白溶液；取1g酪蛋白，加0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml、水40ml，置60℃水浴加入至溶解，放置室温后，加水稀释成100ml，并调至PH8.0.

0.1mol/L硼酸缓冲液；

A液，0.1mol/L硼酸（H2BO3)；称取6.18gH3BO3溶于1000mL水中。

B液，0.025mol/L硼砂（Na2B4O7·10H2O);

称取9.54g硼砂（Na2B4O7·10H2O）溶液1000ml水中。

PH7.4硼酸缓冲液；90ml A液+10ml B液

PH8.0硼酸缓冲液；70ml A液+30ml B液

PH9.0硼酸缓冲液；20ml A液+80ml B液、

材料

酪蛋白酶溶液：50-200ug/ml，用0.1mol/L,PH8.0硼酸缓冲液配制。可用粗提的猪胰蛋白酶，用量根据实际测得比活值而定。

仪器：

试管1.5cm x15cm（x19);移液管1ml（x7），2mL(x3)，5mL(x5);量筒100mL（x1），恒温水浴（0℃）；白瓷板；胶头滴管。

操作方法；

温度对酶活力的影响

取3只试管，按下表操作；

 

空白管；现在试管中加入1.0mL 1%酪蛋白溶液和3.0mL 5%三率醋酸溶液，摇匀后，再加入0.2ml酶液，0.8mL蒸馏水，在37℃保温10min。

将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。

Ph对酶活力的影响

取3支试管按下表操作；

 

 

空白管；现在试管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯醋酸溶液，摇匀后，在加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。

将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较值。

抑制剂对酶活力的影响

取3之试管，按下表操作；

 

空白管；现在试管中加入1.0mL1%酪蛋白溶液和3.0mL5%三氯酸溶液，摇匀后，再加入0.2mL酶液，0.8mL蒸馏水，在37℃保温10min。

将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。

注意事项；

1、由于胰蛋白酶活力不同，因此实验应随时检查反应进行情况。如反应进行的太快，应适当稀释酶液；则应减少酶溶液的稀释倍数。

2、注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。