植物标准品马兜铃的含量测定及马兜铃的炮制
马兜铃为马兜铃科植物北马兜铃或马兜铃的干燥成熟果实。马兜铃具清肺降气、止咳平喘、清肠消痔之功效,临床上用于肺热喘咳、痰中带血、肠热痔血、痔疮肿痛等症。
马兜铃酸A为马兜铃的活性成分之一,也是其毒性成分之一,具有抗癌、抗感染及增强吞噬细胞活性等作用。本实验采用高效液相色谱法,以315nm为检测波长,测定马兜铃生品及蜜灸马兜铃中马兜铃酸A的含量,并以此为指标说明马兜铃炮制的作用和意义。
实验材料
1、仪器
炒锅、锅铲、液化气、索氏提取器、分析天平、称量纸、粉碎机、40目筛、水浴锅,分液漏斗(50ml)2只、容量瓶(5ml)2只、量筒(100ml)、20ml各一只,高效液相色谱仪、YWG-C18色谱柱。
2、药品
马兜铃药材,蜜炼,马兜铃酸A对照品,乙醇(AR),甲醇(AR),水,乙酸(AR),丙酮(AR),甲酸(AR),氢氧化钾(AR),乙醚(AR),硫酸(AR).
实验内容
1、药材的炮制
马兜铃生品:取马兜铃药材,除去杂质,筛去灰屑,揉碎。
密马兜铃:取净马兜铃,加入一式两份开水稀释的蜜炼,伴匀,闷透,置锅中,用文火炒至不黏手。每100KG药材用蜜炼25kg
含量测定
色谱条件 采用YWG-C18色谱柱(300*5mm),以甲醇-水-乙酸(70:29:1)为流动相:流速为1ml/min 紫外检测波长为315nm
标准曲线的制备 精密吸取马兜铃酸A对照品乙醇溶液(0.2ug/ml)2/3/4/5/6ml,分别以乙醇定容为10ml,各样品的浓度分别为0.04/0.06/0.08/0.1/0.12ug/ml,分别进样5ul,以峰面积为纵坐标,进样浓度(ug/ml)为横坐标,的回归方程。
样品的制备 精密称取马兜铃生品及蜜灸马兜铃药材粉末(40目)1.5g于两种150ml索氏提取器中,分别加含10%甲酸的丙酮150ml,在85℃水浴中回流提取5h。提取液回收至干,用0.5%NaOH液15ml使其完全转移至分液漏斗中,调PH=2,用乙醚萃取4此,每次15ml,合并萃取液,水浴上蒸干,用乙醇定容于5ml容量瓶中,得供试液。
样品的测定 取两种供试液5ul,分别进样,测定样品浓度(ug/ml),并计算含量。
含量%=C*5/(W*10六次方)*100%
注 C为所测得 的样品浓度(ug/ml)
W为取样量(g)