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白藜芦醇制备方式

点击次数:1878次     发布时间:2015/6/25 19:47:51

白藜芦醇制备方式
      白藜芦醇,化学名称3,5,4-三羟基-1,2-二苯基乙烯,又名3,5,4-三羟基芪,有顺式与反式两种构型,反式为其稳定结构,而且生物活性更加广泛,分子式为C14H12O3,相对分子质量为228.25,为白色结晶性粉末,熔点为253-255℃溶解于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、氯仿。
白藜芦醇主要存在于葡萄、虎杖、花生、桑葚、松树、买麻藤、朝鲜槐等12科、31个属的72中植物中,白藜芦醇药理作用主要包括抗癌作用,心血管保护作用,抗氧化、抗自由基、神经保护作用、抗炎作用、抗菌、抗真菌作用、机体损伤的保护作用、植物雌激素作用,对骨代谢和内皮素拮抗剂的影响等。
 
白藜芦醇的主要获得途径有三条;1 从天然药物中提取精制,主要一含量相对较高的虎杖和葡萄皮为原料,采用有机溶剂提取、高效液相色谱、硅胶柱层析或大孔吸附树脂吸附分离的方法来提纯虎杖中的白藜芦醇得到了较好的效果。2 化学合成法,李晓光采用三步反应及分离提纯,得到了纯度 98%的白藜芦醇;3 采用生物技术制备,目前,生物技术制备白藜芦醇方法主要有生物合成和微生物生物转化法等
白藜芦醇源于桂皮酸途径生成的4-香豆酰辅酶A。4-香豆酰辅酶A与丙二酸单酰辅酶A缩合,失去一分子CO2生成diketide; diketide与丙二酸单酰辅酶A缩合,失去一分子CO2生产triketide; triketide与丙二酸单酰辅酶A缩合,失去一分子CO2生成tetraketide; tetraketide在白藜芦醇合成酶作用下环合,并失去一分子CO2生成白藜芦醇。此外tetraketide在查尔酮合成酶作用下可环合生成查尔酮,从而衍生得到黄酮类化合物。
利用土壤杆菌转化葡萄细胞生产白藜芦醇
葡萄果皮愈伤组织与培养3D,期间用4.0mol/ l的甘露醇处理六小时,浸染时间20min,浸染温度24℃,共培养36小时;抑菌抗生素用500mg/L头孢噻亏钠,以B5培养基为基本培养基,可使转化率达78%做哟。经过高压纸电泳实验证明MO能合成冠瘦碱,说明T-RNA已经整合到葡萄细胞核基因上并表达。对MO进行测定,发现它生长迅速。生物量提高20%-30%用He-Ne激光器对MO进行辐射12min时获得突变细胞株T12,对T12进行测试,发现他的生长周期比对照前提前8H左右,同时白藜芦醇的合成量提高至对照的1.5-1.8倍。化学诱导子或是真菌诱导子都对白藜芦醇有促进作用,当在细胞生长的第30天左右加入ALCL3(7.5mg/L)+灰色葡萄胞(10mg/L)诱导子时,可使白藜芦醇的产量在细胞本身生长不受影响的条件下增加400-500%
芪合成酶基因转化番茄产生白藜芦醇
http://www.jisskang.com/Products/T26.html
白藜芦醇合成酶是白藜芦醇生物合成途径中的关键酶之一,它以4-香豆酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A为底物催化合成白藜芦醇
谭林在芪合酶基因转化番茄产生白藜芦醇的研究中,采用通过PCR扩增和克隆,获得了来自葡萄品种雷司令和粉红玫瑰叶片中芪合成酶基因,并进行了全系列分析。其次对芪合成酶基因制备表达载体的构建;用BamH I和Sac I同时酶切pS2、pS1以及pBI121、P EV2,使得 S2、S1分别插入替代pBI121;pEV2中的 GUS金银,构建成植物表达载体PBS2、PCV2S1,PBS2中含CaMv35s组成型启动子,使S2基因能在番茄植株的各个部位表达PEC2S1则含有果实特异性启动子TFP2,使S1基因只能在番茄果实中表达。经双酶切鉴定,证实S2  S1基因已插入。将pbs2和pev2s1通过三秦交配法导入土壤杆菌,经过PCR鉴定证实pbs2和pev2s1已导入土壤杆菌 LBA4404浸染2-3min后子夜叶盘在含50mg/L卡那霉素的MS培养基上的处愈率和分化率最佳。通过卡那霉素生根筛选,获得转芪合酶基因的番茄TX0014品种5株,提取这五株转基因植株和一株对照植株的总 DNA,做PCR检测,5株均呈阳性,二队找植株无特异片段出现,气候进行Southern杂交分析检测,结果表明,芪合成酶金银以整合到其中3株的基因组中,最后再用HPLC法测定转基因植株中表达白藜芦醇的含量;其含量分别为12.45mg/kg5.35mg/kg4.35mg/kg,而对对照植株未检出这表明芪合成酶基因已在转基因番茄中表达。

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