土壤酸性磷酸酶活性检测试剂盒
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号: H0486

规格: 50T/48S

产品内容：

试剂一：液体 21mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。试剂三：液体 11mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 1152µL 无水乙醇（自备），48 µL 蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）

标准品：液体 1mL×1 瓶，0.5 µmol/mL 苯酚标准液，4℃保存。

产品说明：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 显著影响，根据最适pH 范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中， S- ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

土壤酸性磷酸酶活性检测试剂盒操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入0.05mL 甲苯（自备），轻摇15min；加0.4 mL 试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：

1.可见分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 试剂一，200 µL 试剂三，20 µL 试剂四，充分混匀， 显色后再加蒸馏水 730 µL，混匀后室温静置 30 min，于660 nm 测定吸光度，记为A 空白管。

3.标准管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 标准液，200 µL 试剂三，20 µL 试剂四，充分混匀， 显色后再加蒸馏水 730 µL，混匀后室温静置 30 min，于660 nm 测定吸光度，记为A 标准管。

4.测定管：取1mL 玻璃比色皿，加入50 µL 上清液，200µL 试剂三，20 µL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水730 µL，混匀后室温静置 30 min，于660 nm 测定吸光度，记为A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

三、S-ACP 活性计算：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总×1000÷W÷T

=725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：0.5 µ mol/mL； V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d；1000：单位换算系数，1µmol=1000nmol。

注：线性范围为 0.03125µmol/mL-1.5µmol/mL。